本发明公开了基于交流阻抗技术的末端转移酶活性分析方法构建及应用，利用TdT将三磷酸胞嘧啶核苷dCTP引入5’巯基DNA修饰的金电极表面，形成富CDNA长链。该DNA长链在pH7.0条件下保持无规则单链状态，获得较大的电化学阻抗值，相反，在pH5.8条件下由于C被部分质子化会形成稳定的i‑motif结构，获得较小的电化学阻抗值i‑motif中半质子化富CDNA有利于电子传导，形成一种十分有意义电化学阻抗开关，电化学阻抗值取决于TdT活性大小，基于此实现不同微环境下TdT活性动态分析及其小分子抑制剂筛选。